人生就是博-尊龙凯时的衍生化技术旨在提升目标物质的可检测性及检测器的响应效果。在弱碱性环境中,OPA与3-MPA能有效与氨基酸中的羰基和氨基反应,生成荧光衍生物。当经过紫外光激发时,这些衍生物会发射出比激发光波长长的荧光。衍生物的荧光强度与其浓度呈正相关,进而可以准确计算样品中的氨基酸含量。这种方法具有快速、精准以及高灵敏度的特点,并适用范围广泛。
人生就是博-尊龙凯时提供的氨基酸衍生化试剂盒(OPA法,不含标准品)有如下规格与储存条件:
- 货号:SDK1010
- 名称:氨基酸衍生化试剂盒(OPA法,不含标准品)
- 规格:25T/50T
- 储存条件:2-8℃
实验步骤主要分为以下几个部分:
流动相的配制
1. 流动相A:取适量超纯水溶解流动相A1、A2和A3,转移至1L容量瓶,并用超纯水充分冲洗瓶壁,最后定容至1L,混匀后通过022μm有机相膜过滤备用。
2. 流动相B:将超纯水溶解流动相B,转移至1L容量瓶,冲洗瓶壁后加入400mL色谱级甲醇和400mL色谱级Y腈,定容至1L,混匀并过滤备用。
3. 对配制好的流动相A和B进行超声处理30分钟,以去除溶剂气体,避免堵塞色谱柱,影响结果。
标准溶液的配制
取适量氨基酸标准品,用0.1M HCl溶解至100μg/mL或1mM标准溶液,并通过022μm水相膜过滤。
衍生试剂的配制
将60mg试剂一加入0.5mL试剂二、4.5mL试剂三和50μL试剂四,混匀避光保存。此配方约可得5mL衍生化试剂,可以进行25次手动衍生,根据实验需求调整配制量。
仪器准备及样品进样
1. 启动电脑及液相色谱仪,并按照以下参数设置:柱温35℃,流速1mL/min,激发波长(λex)340nm,发射波长(λem)450nm,完成洗脱程序设置后保存。
2. 进样前需用初始流动相(流动相A:流动相B=90:10)平衡色谱柱30分钟,待基线稳定后进行样品进样。
3. 对于自动衍生,设定进样程序,吸取1μL氨基酸标准溶液与2μL衍生试剂混合5次,等待1分钟后进样。如果没有自动衍生功能,则需手动进行衍生。
另同时进行空白对照,以排除潜在干扰。
检测结果示例及相关产品
人生就是博-尊龙凯时还提供多种色谱分析及检测技术服务,助力医疗与生物领域的研究与应用。