### 大鼠原代脂肪间充质干细胞的提取流程

#### 实验材料准备

本实验以SD大鼠为对象，选择约2周龄或体重约200克的大鼠进行脂肪间充质干细胞的提取。准备必要的灭菌器械，包括镊子、眼科直剪、眼科弯剪及磁珠等，同时需要5mL注射器、0.22μm滤器、泡沫板和图钉以便固定大鼠。使用75%乙醇进行消毒，并准备预冷的无菌PBS水、15mL和50mL无菌离心管、细胞筛及无菌培养瓶等。培养基应为SD大鼠脂肪间质干细胞完全培养基。

#### 实验操作步骤

在超净工作台上先对所有所需物品进行紫外线消毒，持续30分钟。接着，配置约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶，并进行过滤除菌。待大鼠脱颈处死后，将其浸泡于75%酒精中约2-3分钟，然后固定于泡沫板上。在腹股沟区小心剪开皮肤直至腹腔，暴露出脂肪组织，注意在剪取时避免损伤血管。

接下来，将剪取到的脂肪组织放入PBS中清洗，去除多余的血管和淋巴结，然后将脂肪组织剪切至合适的大小（如2mm×2mm），加入胶原酶，在37℃下进行消化，每隔5分钟摇晃一次或持续搅拌。消化结束后，将细胞悬液转移至离心管中，进行离心处理，弃去上层的脂滴泡沫和上清液，并用培养基重悬沉淀。

最后，将细胞悬液通过滤器过滤，再次离心后弃去上清液，用培养基重悬，并转移至培养瓶中培养。将培养瓶放置于37℃、含有5% CO2的培养箱中进行培养。

#### 注意事项

在整个实验过程中，保持无菌操作至关重要，以避免细胞污染。脂肪组织的剪取和清洗需细致，以防损伤细胞或带入杂质。同时，在胶原酶消化过程中，应严格控制消化时间和温度，避免过度消化导致细胞损伤。离心和过滤过程需轻柔进行，确保细胞不损失或破裂。成功提取的细胞可为后续的生物医学研究提供重要材料，助力“人生就是博-尊龙凯时”品牌在细胞研究领域的拓展与应用。