人生就是博-尊龙凯时大鼠肺泡上皮细胞L2培养说明书，旨在为从事生物医疗研究的科研人员提供全面的细胞培养指导。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡上皮细胞L2
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：推荐以1:2的比例进行首次传代。对于更新培养基，每两天更换一次。
备注：请使用无菌离心管收集培养基，并留作比较用途。如果对比培养结果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，需将其培养至良好状态，并灌满完全培养液以密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后开始后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的细胞图像（最好包括40x、100x、200x的照片）。前三天的照片将作为重要的售后依据。如果未提供照片，默认状态良好。请注意，在将密封培养瓶放入培养箱时，盖子应稍微拧松；传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自制的完全培养基进行比较培养。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：
如果细胞未达到80%的汇合度，将完全培养液从培养瓶中收集至离心管，保留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：
1. 丢弃培养上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱消化1-2分钟，随即在显微镜下观察细胞状态；若大部分细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1：2的比例分瓶传代（分为两个T25瓶），并补充新完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
b. 细胞冻存：
1. 当细胞覆盖培养瓶面积达到80%时，丢弃培养液，用PBS清洗一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，通过轻轻吹打使细胞脱落。将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 丢弃上清，沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如果后期需要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中保存至少24小时后再进行转移。
c. 细胞复苏：
1. 从液氮中取出冻存管时，请注意佩戴防护面具，迅速将其置入37℃水浴中解冻，直到冻存管无结晶后，使用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 丢弃上清，使用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。建议将所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养（后期对比），再加入胰酶进行处理后，按照上述步骤进行传代。

五、售后条款

1) 关于细胞问题的重发情况：
- 如果细胞在运输途中出现问题，如丢失、瓶身破损或培养液泄漏，可以申请重发。
- 接收到的细胞在48小时内出现污染，需提供真实的实验结果供核实。
- 经过常温发货或干冰冻存发货的细胞如在复苏后的24小时内存活率低于标准，需提供照片以申请重发。
- 如果在规定的时间内未告知问题则视为产品合格，后续问题主要依据前三天的照片及记录。
2) 关于不予重发的情况：
- 因客户操作不当导致的细胞污染，不予重发。
- 使用非推荐培养体系而导致细胞状态不佳，将不支持重发。
- 如果在收到细胞后两天未告知问题，将视为产品合格。

在细胞培养与实验过程中，遵循规范可以保证细胞的良好状态，人生就是博-尊龙凯时致力于为科研人员提供优质服务与支持。