人生就是博-尊龙凯时提供的人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC培养指南如下，旨在帮助用户更好地掌握该细胞的培养和处理方法。

一、细胞培养条件

细胞名称：人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% P
传代方法：第一次建议1:2传代
备注：在传代后2天内更换培养基；建议使用无菌离心管收集培养基，以作对比培养，若效果不理想，可直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，建议在良好状态下灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。对细胞瓶进行75%酒精喷洒，消毒后放置于超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的细胞照片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要售后依据。若不提供照片，将默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS洗涤1-2次。
2. 添加0.25%的胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态;
3. 若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶，加入5ml以上完全培养基终止消化。
4. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
5. 按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；随后添加0.25%胰蛋白酶消化液1ml，观察细胞回缩变圆后添加5ml完全培养液终止消化。在15ml离心管中收集悬液后，进行离心操作。弃去上清，沉淀细胞并加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。将冻存细胞放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需先在-80℃冰箱存放24小时。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无冰晶。用75%酒精擦拭管外壁，随后将细胞移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，离心后弃上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2培养箱中培养。第二天，换用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，细胞可能出现脱落现象，属于正常情况。如有大量脱落，可将培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，然后进行处理。请根据操作步骤进行分瓶传代，并确保补充新鲜的完全培养基。

五、售后条款

人生就是博-尊龙凯时承诺对细胞培养过程中的问题进行负责，具体情况如下：

1. 因运输问题，细胞出现损坏或泄漏可重发。
2. 收到细胞后，经实验验证的污染问题，需在48小时内提出，核实后重发。
3. 细胞活性问题，可在收到7天内凭实验结果请求重发。

若因客户操作不当或使用非推荐培养体系导致细胞状态不佳，则不予重发。