人生就是博-尊龙凯时提供的人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC培养指南如下,旨在帮助用户更好地掌握该细胞的培养和处理方法。
一、细胞培养条件
细胞名称:人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC
生长特性:贴壁生长
冻存条件:无血清冻存液(货号:C7001)
培养体系:DMEM + 10% FBS + 1% P
传代方法:第一次建议1:2传代
备注:在传代后2天内更换培养基;建议使用无菌离心管收集培养基,以作对比培养,若效果不理想,可直接购买我们的完全培养基。
二、细胞收到后的处理
收到细胞后,建议在良好状态下灌满完全培养液并封好瓶口,这是运输细胞的最佳方式。对细胞瓶进行75%酒精喷洒,消毒后放置于超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时,以稳定细胞状态。在显微镜下观察细胞生长情况,并拍摄不同倍数的细胞照片(建议40x, 100x, 200x各一张),前三天的照片为重要售后依据。若不提供照片,将默认收到状态良好。
三、细胞培养步骤
a. 细胞传代
当细胞汇合度未超过80%时,将培养液收集至离心管中,保留5ml培养基,放入37℃、5% CO2孵箱培养;若细胞密度超过80%,可进行传代。具体步骤如下:
- 弃去培养上清,使用不含钙、镁的PBS洗涤1-2次。
- 添加0.25%的胰蛋白酶消化液约1-2ml,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞状态;
- 若细胞大部分变圆并脱落,迅速轻敲培养瓶,加入5ml以上完全培养基终止消化。
- 轻轻吹打细胞,使其完全脱落并转移至15ml离心管中,1000RPM离心5分钟,弃上清液,补加1-2ml完全培养基重悬。
- 按照1:2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶,然后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
b. 细胞冻存
细胞生长至覆盖培养瓶的80%时,弃去培养液,用PBS清洗细胞一次;随后添加0.25%胰蛋白酶消化液1ml,观察细胞回缩变圆后添加5ml完全培养液终止消化。在15ml离心管中收集悬液后,进行离心操作。弃去上清,沉淀细胞并加入1ml无血清冻存液(货号:C7001),混匀后转移至冻存管中。将冻存细胞放入-80℃冰箱,如需转入液氮罐,需先在-80℃冰箱存放24小时。
c. 细胞复苏
从液氮中取出冻存管,迅速放入37℃水浴中解冻,直至冻存管内无冰晶。用75%酒精擦拭管外壁,随后将细胞移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中,离心后弃上清,用5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,放置于37℃、5% CO2培养箱中培养。第二天,换用新鲜的完全培养基继续培养。
四、注意事项
在运输过程中,细胞可能出现脱落现象,属于正常情况。如有大量脱落,可将培养液收集至离心管,1000rpm离心5分钟,然后进行处理。请根据操作步骤进行分瓶传代,并确保补充新鲜的完全培养基。
五、售后条款
人生就是博-尊龙凯时承诺对细胞培养过程中的问题进行负责,具体情况如下:
- 因运输问题,细胞出现损坏或泄漏可重发。
- 收到细胞后,经实验验证的污染问题,需在48小时内提出,核实后重发。
- 细胞活性问题,可在收到7天内凭实验结果请求重发。
若因客户操作不当或使用非推荐培养体系导致细胞状态不佳,则不予重发。