抗体药物，如单克隆抗体、双克隆抗体、抗体片段、抗体偶联药物和抗体融合蛋白，因其具备强靶向性、高特异性和较低的毒副作用，在自身免疫疾病和抗肿瘤治疗领域表现出色。当前，随着市场需求不断增长，开发新型抗体药物并优化其下游生产工艺，已经具备了显著的经济价值和社会意义。

抗体的纯化过程相对复杂，需要结合多种分离技术来设计合理的纯化流程，以高效获得高质量的产品。通常，抗体的下游工艺包括以下几个步骤：

1. 细胞澄清收获

通过离心和过滤等方法去除细胞及其碎片，确保后续纯化工艺的有效性。

2. 亲和捕获

在此步骤中，利用Protein A亲和层析技术捕获抗体。由于Protein A源自金黄色葡萄球菌，能够特异性结合IgG FC片段，常常能在一步纯化中达到90%以上的纯度，进而有效捕获人源抗体（非IgG3）及FC融合蛋白，成为捕获抗体蛋白的最佳选择。

3. 低pH孵育去除病毒

通过低pH孵育，能够有效减少病毒负荷（达到7-8 log数量级），之后仅需1-2步纯化即能完成整个抗体的纯化过程。

4. 中间纯化与精纯

进一步去除宿主蛋白、宿主DNA、聚集体、抗体片段、内毒素及残留的Protein A等过程相关杂质。离子交换层析和疏水层析是常用的纯化手段。

离子交换层析

这一过程基于抗体与杂质所带电性差异进行分离，通常使用阴离子交换层析模式去除内毒素、病毒和HCP等杂质。阳离子交换层析则多采用结合洗脱模式，在酸性条件下，抗体结合于介质，通过增加洗脱缓冲液的盐浓度或提高pH进行洗脱，从而达到优异的去除效果。高分辨率的阳离子交换介质如MegaPolyBXS、DiamondCD-S和DiamondSPMustang等，在去除聚集体和宿主蛋白方面表现显著。

疏水层析

疏水层析与离子交换层析相辅相成，抗体对大部分杂质的疏水性通常较强，这一过程主要用于去除抗体聚集体和HCP。在选择HIC介质时，其疏水性对收率和杂质去除效率有重要影响，因此选用合适的配基至关重要。常见的疏水性层析配基的强弱顺序为：Butyl-S＜Butyl＜Octyl＜Phenyl。

随着抗体药物在临床治疗中的广泛应用，完善的下游纯化工艺显得愈发重要。灵活运用多种层析模式及恰当选择层析填料，将为抗体纯化提供更加经济高效的工艺路线。

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